内蒙古大学自学考试实践报告

实习报告实习目的实习是在校大学生唯一一次接触工厂大规模生产的机会，是学生走上社会的良好过渡，走向工作岗位的入门之课。实习让我们了解到理论和实践之间的差异，找到了工厂大规模生产和实验室小量操作的异同。加深我们对所学知识的理解和消化，同时也学习到各工厂的许多技术细节，掌握了生产的基本工艺原理。这次实习提高了自己培养发现，分析，解决问题的能力，受益非浅，达到了实习的效果。实习具体历程及主要内容1 8月5日—6日：在金宇生物制药有限公司参观实习牛口蹄疫疫苗， 非五类疫苗及禽流感疫苗2 8月10日到达塞北星啤酒厂参观实习3 8月23日伊利参观实习，它们主要分为4个部门：冷饮，液态奶，原奶，奶粉部。采用现代化机器大规模生产各类产品。4 8月23日下午：双奇制药有限公司主要生产片剂，胶囊类药物，如金双奇，定君生等5 8月24日-8月26日：托县金河集团，主要参观了饲用金霉素，盐酸金霉素的生产（以金河集团和金宇生物制药有限公司为主）金河集团是托县一个正在蓬勃发展的一个大型民营企业，主要生产饲料添加剂——金霉素，产品远销国美国、澳大利亚。金霉素生产车间有四个发酵车间和两个提炼车间，还有一个新建未投产的精练车间。生产金霉素的工艺流程：一、接种所接的菌种是金色链丝菌，采用沙土培养。主要是在接种室中进行，注意无菌操作。二、发酵将接好的菌种接入实罐灭菌（即罐与培养基经过高温高压一起灭菌）后的种子罐。经一段时间的扩大培养后，将菌种接入总发酵罐，让菌种生长产生菌丝。发育到一定程度，将其分别接入发酵罐中，在这些发酵罐中菌丝上长出点状的次生菌丝，并产生金霉素（胞内分泌）。发酵是关键步骤，需每6小时取样检测金霉素效价及含糖量和氨基氮量；每1小时取样来观察菌丝的长势及染菌程度和pH值。1、测定效价1）每一个发酵罐中的菌液各取两罐，每罐2ml。2）加入PH为1.2-1.4的草酸20g，破坏菌体，使细胞内的金霉素释放。3）稀释2（n-1）倍，n为稀释次数。菌体生长时间越长稀释倍数越大。4） 吸取稀释后的溶液7ml于容量瓶中，加热5分钟。其中一管不加热， 作为空白。5）测分光光度，测的分光光度值通过查表可得金霉素的效价。金霉素一般效价是2.8-3.1。2、检测含糖量A 所需试剂：6moL/L 盐酸，斐林试剂Ⅰ（CUSO4），斐林试剂Ⅱ（NaOH+酒石酸），碘化钾，硫带硫酸钠，淀粉指示剂。B 检测过程1） 吸取0.5ml样品，加入10ml盐酸，加热水解得到淀粉水解物。2） 在淀粉水解物中加入10ml斐林试剂Ⅰ和斐林试剂Ⅱ，煮沸3分钟，溶液成兰色。3） 兰色产物中加入5ml碘化钾和10ml盐酸（6MOL/L），滴定硫代硫酸钠，中途加淀粉指示剂，继续滴定硫代硫酸钠直到兰色退去。4） 记录样品所消耗的硫代硫酸钠的量，与空白所消耗的硫代硫酸钠的量相减，差值查标准糖含量表得其含糖量。3、氨基氮含量的测定A 所需试剂：蒸馏水，甲基红指示剂，硫酸，氢氧化钠，甲醛。B 过程1） 取50ml蒸馏水，加入5ml样品、2滴甲基红指示剂和1滴硫酸。摇匀，样品变红。2） 加入氢氧化钠使溶液为黄色。3） 黄色溶液中加入10ml甲醛缓冲液，摇匀，静置10分钟。4） 滴定氢氧化钠，溶液由黄色变为红色。记录所消耗的氢氧化钠的量，查氨基氮含量表，可得含氨基氮的量。4、观察菌丝的长势从各种子罐和发酵罐中取样涂片，美兰染色，油镜下观察。一般情况是：1） 种子罐中菌丝形状的变化接入孢子 单支状 束状 团状 网状当种子罐中的菌丝长到网状时就必须接入发酵罐中。2） 发酵罐中菌丝形状的变化小束状，网状 单根状 均匀点状（产金霉素）。5、染菌情况的测定样品放于肉汤培养基中培养（加甲基红），14小时后，观察培养基颜色的变化。变黄，则染的菌是产碱菌：变红，则染的菌是产酸菌。然后镜检计数，计算出染菌量。若较严重，加入硝石灭菌：若很严重，到掉发酵液，重新灭菌。检测染菌的关键时期是种子罐期和发酵罐的前期、中期。因为这些时期黄色链丝菌没有大量分泌对杂菌生长具有抑制作用的金霉素。6、测PH值；用PH值精确测量仪测从各罐取来的样品，记录。三、发酵车间工艺流程控制点1、 种子罐1）罐温：全程控制为320C2）罐压：全程控制0.04MPa(移种后进气阀开一圈，控制排气阀)2、 发酵罐1）罐温： 0hr 15hr 18hr 21hr 放罐2）PH值：全程： 0hr 60hr 放罐3）总糖（%）：0hr 30hr 80hr 放罐4）残糖：2.0%以下5）空气压力：全程0.03MPa（排气阀全开，控制进气法阀的压力0.02—0.03MPa）3、 空气温度：450C—550C（阴天控制550C—600C）4、 消后参数1）种子罐：总糖 4.0%—5.0%2）发酵罐：总糖 6.5%—7.5%3）补料： 总糖 32%—40%四、提炼发酵好的发酵液通过管道进入提炼车间，在钙化罐中进行钙化，所用的钙化剂是碳酸钙，它利用钙离子替换两个氢离子，使金霉素结晶。将含有结晶金霉素的菌丝体通过板框过滤，挤出水分成滤饼，然后干燥。五、分装分装时按照不同的含量进行配比，达到特定的含量，包装。六、精练精练车间是对发酵好的发酵液进行酸化、板框过滤 、滤液 、再滤、滤液 、沉淀、过滤 、初品、过滤 、抽提、过滤 、结晶、离心、干燥，纯度达到95%以上。其通过沉淀结晶的方法精练金霉素，过程如下：1、发酵液的预处理和过滤发酵液草酸化至PH1.4—1.6，加0.08%—0.10%（W/V）黄血盐和硫酸锌，板框过滤，吹干。2、复盐沉淀加入1.0%—1.2%（W/V）碳酸钙，1.8%—2.5%（W/V）氯化镁，用氨水调PH至7.8，板框过滤，吹干。3、溶解 净化 过滤按抽提4—6万单位/毫升悬浮于水中，加草酸，用化学纯盐酸调PH至1.6—1.7，加入0.08%—0.10%（W/V）黄血盐和硫酸锌，加0.05%（W/V）亚硫酸氢钠，板框过滤。4、结晶加入4%—6%化学纯盐酸，升温到40C，1小时（PH4.5—5.0）5过滤洗涤真空过滤，用水和乙醇洗涤，得到盐酸金霉素湿晶体。干燥，得到纯度为95%以上的盐酸金霉素。金宇生物制药有限公司是生产口蹄疫疫苗和少量其他疫苗如禽流感疫苗的公司，生产药品达到四十多种，分六个车间，其中四个已通过国家GMP认证，在国内有很大的影响力。口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的，偶蹄兽发生的一种高接触性传染病，传染速度惊人，发病率高。其典型症状为家畜口腔、鼻和蹄等地方出现大量水泡，同时伴有烧肿等症状。严重影响了畜牧业的发展。口蹄疫疫苗工艺流程总流程：准备工段 细胞培养 病毒复制 灭活阻断 乳化 分装 检验 销售一、细胞培养1）培养细胞 生产口蹄疫疫苗所用的细胞是金黄色仓鼠肾细胞（BHK21），它是一种传代细胞，最多不超过14代，多为成纤维细胞。2）培养液 培养细胞所用的营养液是乳汉液与45%的MEM培养基和新生牛犊血清。其中乳汉液由甲液、乙液和水解乳蛋白混合而成。甲液：NaCL 80g 乙液: NaH2PO4.12H2O 15.2gKCL 40g KH2PO4 6gCaCL 14g 葡萄糖 100gMGSO4.7H2O 20g 1%酚红 160g3）培养 转瓶培养，在细胞生长过程中要进行镜检，观察细胞的长势。4）杂检 可观察培养液颜色。5）细胞消化 当细胞长到一定程度，就用分散液对贴壁生长的细胞进行分散处理。所用的细胞分散液是EDTA—胰酶（1：250）分散液：NaCL800g ,KCL40g,葡萄糖100g,NaHCO358g, 胰酶50g,EDTA20G,混合。再向混合液中加入1%的酚红，十万单位/毫升的青霉素，十万单位/毫升的链霉素二 、病毒复制1） 病毒性质 正20面体，易裂解成四个片段VP1（起免疫作用），VP2，VP3，VP4。2） 病毒培养条件 经过人工驯化。3） 病毒维持液 当有90%以上的细胞被分散下来后，就换上维持液进行病毒复制。维持液（欧氏液）的配方如下：NaCL680g， KCL40g, MGSO4.7H2O 20g,NaH2PO4.12H2O14g, 无水葡萄糖100g，1%酚红200ml，无水CaCL20g，水解乳蛋白500g，口蹄疫病毒5%—10%4）培养 在病毒复制的过程中，要进行镜检，观察细胞的形态的变化。5）细胞病变 病变的细胞是圆形，排列不整齐，边缘整齐，折光率好，透明。6）收毒 当有75%—90%的细胞病变是就可收毒。因为病毒存于细胞中，所以要通过冻融的方法使病毒释放。收回的病毒要进行无菌检验和效价的测定。三 灭活阻断1）灭活 灭活是指病毒经过灭活剂的处理后，其抗原性保存，遗传性被破坏。所用的灭活剂是BEA（过量）。BEA在经过0.2N的氢氧化钠的作用下环化成BEI，BEI具灭活作用。加入灭活剂的病毒液，300C恒温灭活28小时，每4小时搅拌一次，每次5分钟。2） 阻断 灭活28小时后，要立即用阻断剂将灭活过程阻断。所用的阻断剂（过量）是带2个结晶水的硫代硫酸钠。阻断完后要进行无菌检验和安全检验。3）乳化 乳化的目的是将病毒制成双向疫苗，即水包油包水，可持久免疫。水相和油相的配方：水相：抗原液 96份 油相：白油 9份土温—80 4份 司班—80 1份总量 66.6份 总量 33.3份四 乳化过程向33.3份水相中加33.3份油相，在均质机中混匀，形成油包水，然后再向油包水中加入33.3份水相，使之在油包水的基础上再形成水包油。然后进行无菌检验，物理性状的检验，测黏度和粒度。五 分装分装完后再进行无菌检验，安全检验和效检。塞北星啤酒厂生产的啤酒是以麦芽为原料，酵母发酵，CO2起泡，低酒精浓度（0.5-4.5%）的饮料。其主要原料是大麦，玉米等，经过选麦，备类，浸麦，发芽，焙燥得分级处理，通过粉碎，固态糖化，发酵，冷却流程得到了清澈透明的啤酒。伊利集团是内蒙古自治区大型奶制品加工制造企业，其先进的生产技术和现代化的流水线方便了我们的参观。该厂的纯奶灭菌采用超高温1360C-1400C灭菌3-4s和850C巴氏灭菌。用活性碳过滤器，反渗透膜，混床（阴、阳离子树脂），石英砂，微孔过滤器，O3杀菌等一系列方法彻底灭菌，使产品的质量得到保障。双奇制药厂以生产金双歧（GOLDEN BIFID）类产品为主，其产品为活菌制剂。双歧杆菌即保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌。菌种通过灭菌（灭菌后72小时需重新灭菌），接种，厌氧培养，离心，冻干，粉碎，等过程变为成品，分为片剂（泡罩包装）和胶囊类（硬铝包装）药物两类，其产品有金双奇，定君生等。总结：随着近年来微生物学的迅速发展，微生物已经得到了广泛的应用，尤其是在生物制药和食品工业中，由于其具有培养简单，繁殖快，生产能力强，设备简易等特点，使各生物公司能大规模的生产各种生物制剂。我们这次实习下了车间，切实感受到了工厂的大规模操作，认识、了解了大部分的仪器，掌握了少数设备的操作。明确了工厂生产的细节操作和整体的工艺流程，尤有体会的是工厂生产时的无菌操作。为我们在实验室的无菌操作加深了影响，也将为我们以后从事的工作打下扎实的基础。这次实习的地点很有针对性，让我们真正学习到了在课本和实验室学习不到的东西，是一次非常成功的实习。04年暑期社会实践报告内蒙古大学生命科学学院2001级生物技术专业章侨婴